载药外泌体可以在预处理的细胞或安排中排泄，并能从细胞排泄的EVS中别离出具有包封药物的外泌体。

  一般，药物可以终究靠两种办法分类为外泌体：自动加载和被迫加载。自动加载办法也称为长途或后加载办法，这是一种用别离的外泌体进行药物加载进程的办法。被迫加载办法也称为预加载办法，处理从预处理的供体或源细胞排泄载药外泌体。被迫加载办法不需要在体系中增加活性物质，自动负荷办法已被证明在完成更高的药物囊泡比方面更有用，因为它具有自动泵送机制。相反，后加载办法比亲水药物更适合疏水性药物。

  外泌体药物负荷办法。载药外泌体可以在预处理的细胞或安排中排泄，并能从细胞排泄的EVS中别离出具有包封药物的外泌体。药物也可以终究靠自动/被迫载药办法加载到现成或别离的外泌体中。

  1.用靶向外泌体供体细胞孵育药物用所需药物处理靶细胞，然后从预处理的细胞排泄载药外泌体，预处理的SR4987间充质基质细胞中PTX负载外泌体的排泄。在研讨中，首先将细胞处理并用低剂量PTX孵育24小时，然后将细胞洗刷并从头接种在带有新鲜培养基的新烧瓶中。终究，48小时后从细胞培养基中别离并搜集负载PTX的外泌体。为了开释载药外泌体，预处理的供体细胞可露出于生物或机械影响，例如热、缺氧和紫外线. 别离外泌体药物的孵育这种办法称为被迫加载办法。药物和外泌体简略地一同孵育一段时刻，药物因为浓度梯度而分散到外泌体中。该办法适用于装载疏水性药物，药物负载功率与药物的疏水性直接相关。Dongmel等人展现了经过孵育办法加载姜黄素的外泌体。将外泌体和姜黄素在PBS中混合，并在22°C下孵育5分钟，并依据不同的蔗糖梯度离心混合物。与游离姜黄素比较，外泌体包封增强了姜黄素的溶解度、稳定性和生物利费用。类似地，经过在室温下在PBS缓冲液中孵育18小时，将酶过氧化氢酶加载到外泌体中。

  1. 用膜透化器孵育该办法运用膜透化剂表面活性剂，如皂苷。简而言之，胆固醇和表面活性剂的相互效果导致外泌体膜通透性。它适用于将亲水小分子加载到外泌体中，比被迫孵育办法高11倍，与简略孵育比较，膜渗透法提高了上样功率。

  2. 超声处理别离的外泌体与药物混合，然后运用均质器探针进行超声处理。超声加载法的药物负载运用机械剪切力经过变形的膜分散到外泌体中。超声处理后外泌体膜完整性下降。虽然超声处理后膜微粘度明显下降，但超声处理进程不会影响膜结合蛋白和外泌体的脂质含量。此外，外泌体膜的完整性可以终究靠在37°C下孵育1小时来康复。

  3. 挤出它是一种后加载办法，运用依据注射器的脂质挤出机并具有严苛的机械力。简而言之，将方针药物和别离的外泌体在调理温度下加载到具有100至40nm多孔膜的挤出机中，然后将药物与破碎的外泌体膜混合，挤出型药物负载对外泌体的好处。卟啉被加载到三阴性乳腺癌细胞（MDA MB-231）衍生的外泌体中。与孵育法比较，揉捏型上样时卟啉的细胞毒性效果更高。依据成果得出，揉捏法负载改变了原始外泌体的zeta电位。挤出工艺的数量有助于有用的药物装载。

  4. 冻融循环该办法有三个进程：将别离的外泌体与药物在室温下孵育给定时刻，在-80°C或更低（液氮）下冷冻，终究在室温下冻结。为了更好地载药，上述进程至少重复三个周期。与超声或揉捏法比较，冻融加载法的载药量较低。

  5. 电穿孔该办法运用电场搅扰外泌体的磷脂双层并在其上发生小孔。最有用的电穿孔计划运用750 V和10个脉冲。然后，药物可以终究靠兴旺的孔分散或分类，一起，在加载后收回膜。较大的分子，如核苷酸（siRNA/miRNA）可以终究靠电穿孔加载办法加载到外泌体中。电穿孔还有助于加载较小的亲水分子。因为与RNA集合和外泌体不稳定性相关的问题，它具有低负载才能。